文久元年（1861年）11月15日、和宮一行は江戸城内の清水屋敷に入った。11月21日、登城した岩倉具視・千種有文は老中・久世広周、安藤信正とおいて会見し、「幕府は和宮を人質に天皇に譲位を迫るつもりだ」との風説について詰問し、幕府に二心無いことを示すため、将軍自らが書いた誓紙を朝廷に提出することを求めた。
12月11日、和宮は江戸城本丸大奥に入る。江戸到着から入城まで1ヶ月近くを要したのは、御所風の遵守という点で和宮側と幕府・大奥側の調整が難航したためである。同13日、先の岩倉らの要求に屈する形で将軍・家茂は和宮降嫁に関して幕府に二心の無い旨の誓紙を書き、翌日に岩倉らはこの誓書と老中の副書を持って江戸を発ち、京に戻った。
この頃には、庭田嗣子の書状によって和宮の江戸での状況は孝明天皇の知るところとなっていた。書状には、
和宮の「御所風の暮らしを」との要望が殆ど守られていない。
明春の仁孝天皇の年回忌のための上洛が「和宮や女官たちが江戸での暮しになれていないから」との理由で延期を要請された。
天璋院が、和宮に様々な無礼をはたらいた。
和宮と自分達に宛がわれた部屋は暗くて狭い。
大奥の女たちと折り合いが悪く、和宮が涙したこともある。
ことなどが書かれていた。天皇は釈明のため老中か若年寄を京に呼び出すようとの意向を示したが、九条尚忠・岩倉具視らが幕府と交渉して、天璋院に事の次第を糾すことなどで決着を図っている。ただし、孝明天皇は「御所風は和宮に限った特例である」としており、後の御台所がこれに倣う必要の無いことや、武家の棟梁たる将軍が御所風に影響されて柔弱にならぬよう気をつけるようとの意向を文久2年（1862年）正月に和宮に宛てた手紙に記している。
文久2年（1862年）2月11日、和宮と家茂の婚礼が行われる。その様子はそれまでの13代の将軍たちの婚儀とは異なっていた。和宮が征夷大将軍よりも高い身分である内親王の地位で降嫁したため、嫁入りした和宮が主人、嫁を貰う家茂が客分という逆転した立場で行われることとなった。このことは後々まで江戸城内において様々な形で尾を引くこととなった。
その後、京都では尊皇攘夷を唱える志士が各地から集まる事態となり、朝廷は薩摩藩の島津久光に市中の警備を依頼。 これに応えて朝廷の信頼を得た久光は、自身が構想する幕政改革案、
将軍が諸大名を率いて上洛し、国事を議すること。
沿海5大藩の藩主を大老に任じて国政に参加させる。
一橋慶喜を将軍後見職に松平春嶽を任じ将軍の補佐にあたらせる。
の三ヶ条を朝廷に献策し、朝廷はこれを幕府に要求するため勅使・大原重徳を江戸に派遣する。勅使一行は薩摩藩兵に警護されて6月7日に江戸入り。大原は幕府への物とは別に和宮宛の勅書も持参しており、それには「天皇の思召しと行き違いが無い様、三ヶ条の要求は和宮から将軍に伝えるように」とあり、6月13日に和宮は勅書の写しを将軍に手渡している。7月1日、幕府は三事策を受け入れ、大原は22日に京に戻った。
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8月に入ると、京では攘夷を一向に実行しない幕府への批判から、天皇の「攘夷親征」に期待する声が強まった。同時に和宮の降嫁に尽力した公卿・女官等への反発も強まり、久我建通・岩倉具視・千種有文・富小路敬直が蟄居・辞官・落飾。前月に関白を辞していた九条尚忠も重慎み・落飾。堀河紀子・今城重子は辞官・隠居・落飾を命じられた。
10月12日、朝廷は幕府に破約攘夷を督促するため、三条実美・姉小路公知の両名を勅使として派遣。11月27日、両勅使は将軍に対面（江戸には10月28日に着いていたが、将軍が麻疹にかかっていたため対面が遅れた）。12月5日には「攘夷実行について説明するため上洛する」旨の返答書を受け取り、江戸を後にする。
これに先立つ11月23日、幕府は天皇の叡慮に従う形で和宮の呼称を「御台様」から「和宮様」へ改めると発表。
文久3年（1863年）2月13日、家茂は江戸を出立。和宮は家茂の無事を祈り、24日から増上寺の黒本尊の御札を勧請し御百度を踏んでいる。家茂は2月19日に二条城に入り、3月7日に参内、11日には孝明天皇の加茂行幸に供奉した。4月11日の石清水八幡宮への行幸には風邪による高熱を理由に欠席したが（天皇から「攘夷の節刀」を受けるのを避けるために仮病を使ったといわれる）、「5月10日を以って攘夷を実行する」旨の奉答書は出さざるを得なかった。6月16日に家茂は海路にて江戸に帰還した。
八月十八日の政変で長州藩を始めとする過激な尊皇攘夷を唱える勢力が京都から追放されると、同29日、家茂に対し再び上洛せよとの天皇の内意が出た。和宮は将軍出立前の9月4日から春日神社にお百度詣でを始め、11月10日には朝廷に「御用の済み次第、将軍の速やかな江戸帰還」を願っている。12月27日、家茂は海路を京へ向けて出立した（翌年5月8日帰府）。
元治元年（1864年）7月19日、先の政変で都を追われた長州藩が御所を襲撃する禁門の変が起る。8月2日、家茂は長州征伐の命を下す。長州藩は事変の責任者を処分し、藩主父子が謝罪文を提出して恭順の意を表して事態は一旦収束する。しかし12月15日、長州藩で政変（功山寺挙兵）が起り、尊攘派が再び政権を握った為、家茂は自ら指揮を執っての長州征伐に乗り出す。慶応元年5月16日、家茂は大奥対面所で和宮の見送りを受けた後、品川から海路大阪へ向かった。これが二人の今生の別れとなる。